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科研級倒置共聚焦顯微鏡——原理、功能與活細胞成像應(yīng)用

更新時間:2026-06-21      點擊次數(shù):69
  科研級倒置共聚焦顯微鏡采用倒置光路設(shè)計,適配主流商用倒置顯微鏡機身,專為活細胞、組織切片及熒光標記樣本的共聚焦成像而設(shè)計。
  一、共聚焦成像原理簡述
  系統(tǒng)以多線半導(dǎo)體激光器(標配405/488/561nm,可選多波長)為激發(fā)光源,經(jīng)聲光調(diào)諧或機械快門控制強度后,由檢流鏡或共振掃描鏡將激光聚焦至樣品焦平面。樣品發(fā)出的熒光經(jīng)同一物鏡收集,通過二向色鏡與發(fā)射濾光片分離,再經(jīng)可調(diào)共聚焦針孔(0.5–10AiryUnit)阻擋焦平面以外的雜散光,僅讓焦平面信號到達高靈敏PMT或GaAsPPMT探測器,逐點掃描重建為光學(xué)切片(OpticalSection),有效消除厚樣本離焦模糊。
  倒置結(jié)構(gòu)中物鏡位于樣品臺下方,特別適合對培養(yǎng)皿、多孔板中貼壁生長的活細胞進行底部玻底觀察,并可配合incubation系統(tǒng)維持37℃、5%CO?環(huán)境,支持長時活細胞成像。
 

科研級倒置共聚焦顯微鏡

 

  二、主要功能與軟件特點
  Live實時預(yù)覽:實時調(diào)節(jié)、激光強度與焦平面,即時獲得最佳熒光圖像。
  Z-STACK三維重構(gòu):設(shè)定Z軸掃描范圍與層間距,采集系列光學(xué)切片并重構(gòu)三維熒光分布,可用K1-3DViewer進行體渲染、截面分析與熒光強度提取。
  Z-SNAP/EDF深度投影:從Z-stack中提取最大強度投影(MIP)或特定深度信息,適用于傾斜或厚樣本。
  TimeLapse延時成像:按設(shè)定時間間隔連續(xù)采集,用于追蹤細胞分裂、鈣信號、自噬等動態(tài)過程。
  TileStitching圖像拼接:對同一焦平面或多個Z層進行區(qū)域掃描與自動拼接,獲得大視場高分辨圖像。
  AutomaticWellPlateScanning:自動識別6/12/24/96/384孔板坐標,逐個孔自動定位與成像,適合高通量初篩。
  Video錄制:連續(xù)幀拼接輸出AVI/序列圖像,便于動態(tài)過程回放分析。
  三、典型應(yīng)用領(lǐng)域
  活細胞熒光蛋白(GFP/RFP/mCherry等)動態(tài)觀測與軌跡追蹤
  細胞器共定位、核質(zhì)轉(zhuǎn)運及信號分子時空分布研究
  3D培養(yǎng)(球體、類器官)熒光結(jié)構(gòu)分析
  神經(jīng)突起生長、突觸囊泡動態(tài)監(jiān)測
  多孔板高內(nèi)涵初篩(配合自動孔板掃描)
  固定組織切片多重標記共聚焦分析
  科研級倒置共聚焦顯微鏡通過模塊化激光/探測/掃描單元與成熟商用倒置機身兼容設(shè)計,兼顧高圖像質(zhì)量、操作便捷性與系統(tǒng)性價比,是細胞與分子生物學(xué)實驗室進行共聚焦熒光成像的可靠平臺。
 

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